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知识点总结
该知识点包括限制性核酸内切酶、DNA连接酶、基因进入受体细胞的载体等几个要点知识。
1. 限制性核酸内切酶：又称“分子手术刀”，简称限制酶。同学们一定要掌握该酶的来源、功能及结果。来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。
2. DNA连接酶：又称“分子缝合针”，能够将切下来的DNA片段拼接成新的DNA分子。对于DNA连接酶的掌握是要区分开E·coliDNA连接酶和T4-DNA连接酶。
①相同点：都缝合磷酸二酯键。
②区别：E·coliDNA连接酶来源于T4噬菌体，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶能缝合两种末端，但连接平末端的的效率较低。
3.基因进入受体细胞的载体：又称“分子运输车”。同学们需要掌握以下知识要点：
（1）载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存。②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。
（2）最常用的载体是质粒,它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。
（3）其它载体：噬菌体的衍生物、动植物病毒。
常见考法
在平常测试中，多以选择题形式出现，或在考查基因工程的填空题中占有部分比重。通常考查限制酶的专一性、DNA连接酶的种类及功能、运载体的条件及种类等知识点，试题难度不大。在高考中，从近几年生物试题看，基因工程是高考考查的重点，本部分知识通常作为考查基因工程的部分填空出现，因此同学们一定要掌握住相关基础知识。
误区提醒
本部分主要易错点包括不能准确区分黏性末端和平末端、DNA连接酶和DNA聚合酶；混淆限制酶切割位点等。因此，复习的关键是准确把握上述知识点：
首先，要区分五种相关酶。
其次，掌握限制酶和DNA连接酶之间的关系，如图：
【典型例题】
根据基因工程的有关知识，回答下列问题：
（1）限制性内切酶切割DNA分子后产生的片段，其末端类型有____________和____________。
（2）质粒运载体用EcoRⅠ切割后产生的片段如下：
AATTC……G
G……CTTAA
为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，还可用另一种限制性核酸内切酶切割，该酶必须具有的特点是________________________________。
（3）按其来源不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即__________DNA连接酶和__________DNA连接酶。
（4） 基因工程中除质粒外，____________和____________也可作为载体。
【答案】（1）黏性末端 平末端 （2）切割产生的DNA片段末端与EcoRⅠ切割产生的末端相同（其他合理答案也可） （3）E·coli T4 （4）噬菌体 动植物病毒（其他合理答案也可）
【解析】（1）DNA分子经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有黏性末端和平末端两种类型。（2）为使运载体与目的基因相连，应使二者被切割后产生的末端相同，故用另一种限制酶切割产生的末端必须与EcoRⅠ切割产生的末端相同。（3）根据酶的来源不同，DNA连接酶分为E·coliDNA连接酶和T4DNA连接酶。（4）在基因工程中，通常利用质粒作为运载体，另外噬菌体和动植物病毒也可作为运载体。
