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知识点总结
该知识点包括PCR原理、PCR反应过程、实验操作及操作提示等几个要点知识。
1. PCR原理：DNA热变性原理，即：
此外，DNA的合成方向也是必须掌握的知识要点。DNA的两条链是反向平行的，通常将DNA的羟基末端称为3，端，而磷酸基团的末端称为5，端。DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，而只能从3，端延伸DNA链，因此，DNA复制需要引物。当引物与DNA母链通过碱基互补配对结合后，DNA聚合酶就能从引物的3，端开始延伸DNA链，DNA的合成方向总是从子链的5，端向3，端延伸。
在DNA的复制过程中，复制的前提是DNA解旋。在体外可通过控制温度来实现。在80-100℃的温度范围内，DNA的双螺旋结构将解旋，双链分开，这个过程称为热变性。PCR利用了DNA的热变性原理，通过控制温度来控制双链的解聚与结合。由于PCR过程的温度高，导致DNA聚合酶失活，后来耐高温的DNA聚合酶的发现和应用，大大增加了PCR的效率。
2. PCR反应过程
（1）变性：当温度上升到90 ℃以上时，双链DNA解聚为单链，如下图：
（2）复性：温度下降到50 ℃左右，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合，如下图：
（3）延伸：温度上升到72 ℃左右，溶液中的四种脱氧核苷酸在DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链，如下图：
3. 实验操作及操作提示：
实验操作：在实验室中，做PCR通常使用微量离心管，它是一种薄壁塑料管。具体操作时，用微量移液器，按PCR反应体系的配方在微量离心管中依次加入各组分，再参照下表的设置设计好PCR仪的循环程序即可。
操作提示：为避免外源DNA等的污染，PCR实验中使用的微量离心管、枪头、缓冲液以及蒸馏水等在使用前必须进行高压灭菌。PCR所用的缓冲液和酶应分装成小份，并在-20℃储存。使用前，将所需试剂从冰箱拿出，放在冰块上缓慢融化。在微量离心管中添加反应成分时，移液管上的枪头要更换。
常见考法
在平常测试中，该知识点多以选择题或简答题的形式出现。通常考查DNA复制与PCR技术的区别、PCR反应过程等相关问题，出题形式图文兼有，灵活多样，但是难度不大。从近几年全国课标卷高考生物试题看， PCR技术没有在选修1的选做题中出现过，只是偶尔在选修3考查基因工程的选做题出现过个别填空，。因此，对于本部分知识记住关键的基础知识。2011年江苏生物卷33题中出现过该知识点，并且不都是简单的识记。
误区提醒
不能准确把握PCR技术与DNA复制的区别是同学们易错的主因。
此外，对于PCR技术中的引物理解不到位也是失分的一个原因。可以从以下几方面 理解“引物”：①含义：引物是一小段单链DNA或RNA分子。②作用：为DNA聚合酶提供合成的3′端起点。③种类：扩增一个DNA分子需要2种引物。④数目：引物数目等于新合成的DNA子链数目。⑤与DNA母链的关系：两种引物分别与DNA母链的3′端通过碱基互补配对结合。
