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知识点总结
该知识点包括培养基、无菌技术、实验操作（制备牛肉膏蛋白胨固体培养基、纯化大肠杆菌）等几个要点知识。
1. 培养基：培养基的类型
（1）加入培养基中的凝固剂（如琼脂），一般不能被微生物利用，只起到凝固作用。
（2）选择培养基一般只生长具有特定目的的微生物，鉴别培养基可以存在其他微生物，而且能鉴别特定的微生物。
2. 无菌技术：消毒与灭菌
用酒精消毒时，70%的酒精杀菌效果最好。若浓度过高，菌体表面蛋白质凝成一层保护层，则乙醇分子不能渗入其中；若浓度过低，杀菌能力减弱。
获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染，无菌技术可从如下四个方面展开：
（1）对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒。
（2）将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。
（3）为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。
（4）实验操作时，应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。
3. 实验操作（制备牛肉膏蛋白胨固体培养基、纯化大肠杆菌）：
制备牛肉膏蛋白胨固体培养基步骤是：
（1）计算：根据培养基配方比例，计算配制100ml的培养基，各种成分用量。
（2）称量：准确称取各种成分。
（3）溶化：将称好的牛肉膏加少量水溶化后，加入称量好的蛋白胨、氯化钠、琼脂加热溶解，并补加蒸馏水定容至100ml。
（4）灭菌：将配置好培养基转移到锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121℃，灭菌15～30min。将培养基用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在160～170 ℃下灭菌2h。
（5）倒平板：待培养基冷却到50 ℃左右时，在酒精灯附近倒平板。
常见考法
考题多以非选择题的形式出现，考查微生物的培养条件、代谢特点，实验室微生物培养规范和主要步骤。预计未来的高考命题将通过生产生活中有关微生物计数、微生物分离与培养等实际问题考查培养基消毒灭菌等基础知识。
误区提醒
1.对于有关微生物的培养和应用的题目，应注意从以下几个方面把握：
（1）培养基营养构成：包括碳源、氮源、无机盐和水四部分，有的还需加入生长因子等；其中各成分由哪种有机物提供，应根据其化学元素组成来推断。
（2）实验过程中，必须设置对照实验，要明确设置对照实验的方法。
（3）了解无菌操作技术，以及常用的方法和适用范围。
2.培养基的制作是否合格 ：如果未接种的培养基在恒温箱中保温1～2 d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。
3.接种操作是否符合无菌要求：如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。
4.是否进行了及时细致的观察与记录：培养12 h与24 h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同。
【典型例题】
请回答下列关于微生物的相关问题
（1）微生物接种的方法很多，最常用的是平板划线法和______________，平板划线前要对接种环进行灼烧，原因是为了________。
（2）用培养基培养微生物时，培养基中应有_________、________、________和_________等营养，同时还必须满足微生物生长对_______________、________、________的要求。
（3）用唯一碳源培养基分离微生物的主要操作步骤为①原料称量、溶解②________③分装、包扎④灭菌⑤倒平板⑥________⑦培养。
答案：（1）稀释涂布平板法 灭菌 （2）碳源 氮源 水 无机盐 特殊营养物质 pH 氧气 （3）调节pH 接种
解析：（1）微生物最常用的接种方法是平板划线法和稀释涂布平板法，平板划线前要对接种环进行灼烧，原因是为了灭菌。 （2）培养微生物时，培养基中应有碳源、氮源、水、无机盐等营养，同时还必须满足微生物生长对特殊营养物质、pH、氧气的要求。 （3）用唯一碳源培养基分离微生物的主要操作步骤为①原料称量、溶解②调节pH③分装、包扎④灭菌⑤倒平板⑥接种⑦培养。
